病毒感染考评标准表（样表）

考评人

被考评人

考评时间

一、实验准备

1.1 感染前一天293T或293TN消化细胞，铺24孔板，混匀，将细胞置于5%CO2，37℃恒温培养箱培养。

要求：

① 慢病毒感染，感染前融合度至30%左右

② 腺病毒感染，感染前融合度至80%左右

③ 腺相关病毒感染，感染前融合度至50%左右

1.2 准备polybrene感染试剂备用

1.3 准备待感染病毒备用，并计算相应用量（病毒量=细胞量*MOI/滴度）

1.4 标记不同病毒孔板位置，将病毒按照孔板位置排序

二、操作步骤及注意事项

2.1 根据培养基体系，加入polybrene感染试剂，终浓度5μg/ml（腺病毒感染不加polybrene，感染前需5%FBS培养基换液）

2.2 病毒使用混合均匀，将相应体积病毒加入到孔板中（枪头没入液面以下，不可触碰到细胞，移液枪多吹打几次保证枪头内无残留病毒），前后摇动培养板使其均匀分布，置于5%CO2，37℃恒温培养箱培养

2.3 感染12-20小时后，换成新鲜完全培养基进行培养（腺病毒感染根据细胞状态确认是否换液，对状态无影响无需换液，有影响换成5%FBS培养基）

2.4 按规定正确填写《病毒感染细胞操作记录》

2.5 感染72小时后在荧光显微镜下观察细胞感染效率，拍照并记录细胞状态和感染效率（慢病毒感染72小时，腺病毒感染及腺相关病毒感染48小时观察）

2.6 根据后续实验内容进行传代或送样

2.7 按规定正确填写《表达检测送样单》

三、提问

3.1 不同病毒感染细胞铺板量及MOI

① 慢病毒感染，感染前融合度至30%左右 MOI 10

② 腺病毒感染，感染前融合度至80%左右 MOI 100

③ 腺相关病毒感染，感染前融合度至50%左右 MOI 1000000

3.2 不同病毒感染polyberene终浓度

① 慢病毒感染，5μg/ml

② 腺病毒感染 ，不加polybrene

③ 腺相关病毒感染，5μg/ml

3.3 膜蛋白感染体系

① 293T或293TN，2个6cm皿；

② 其他细胞，2个10cm皿

四、考评时表现

考评过程中实验操作细致，态度良好

五、考评后实验质量判定

5.1 感染前细胞状态良好，铺板均匀，密度适中

5.2 感染后细胞状态良好，感染效率80%以上，密度80%以上