流式样本制备注意事项

本试卷考查流式细胞术实验相关的专业知识，请根据题目要求完成作答，满分45分。

Q1:姓名

填空1

Q2:手机

填空1

Q3:邮箱

填空1

Q4:关于样本处理，以下说法正确的有：

小鼠的脾脏、淋巴结组织需要加入胶原酶消化成单个细胞；

制备小鼠肺脏组织单细胞前，需要灌出BALF和血液；

消化细胞系做凋亡实验时，胰酶中可以含有EDTA，但是染色Buffer需要使用试剂盒中的Buffer；

从外周血中分选Naïve T细胞时，可以使用裂红液裂解后得到免疫细胞再进行染色和分选

Q5:关于细胞数量准备相关的描述，下列正确的有：

分析型流式，每组样本间的细胞数量尽量一致，使各组间的MFI可比；

分析型流式，样本收集的终止条件建议是All Events 10000个；

分选型流式，血细胞数量准备尽量充足，例如分选10万个目的细胞做转录组测序，就准备1百万个初始细胞即可；

分析型流式细胞仪上机前可以使用200目（70μm）滤网，分选型流式仪上机前需要300目（40μm）滤光过滤样本

Q6:在设计传统流式仪的Panel时，以下配色正确的是：

APC对APC-Cy7的影响大于APC-Cy7对APC的影响，所以设计CD3和CD45RA到这两个通道时，CD3放APC更合理；

BV421通道不受其他通道影响，可以把较为重要的指标PD1、Tetramer等放于这个通道；

PD1、CTLA4、TIM3、LAG3等共抑制指标会有共表达，所以可以选FITC、BV510、Percp、APC-Cy7这4个通道，激发光和发射光都较少重叠；

死活染料在很多方案设计中都很重要，所以应该放在BV421、PE、APC这类比较好的通道中。

Q7:以下关于光谱和纳米流式Panel设计与优化相关的描述，正确的有：

光谱流式设计Panel比传统流式更复杂，需要考虑染色指数、相似性指数、逸漏扩散矩阵等；

相似性很高的荧光素对，例如APC和AF647，可以分配给CD3与CD19、CD4与CD8，IFNγ与IL-4等这些互斥指标；

溢出扩散矩阵显示RY703会干扰PE通道，但是PE不干扰RY703通道，所以PE应该分配给下级抗原，RY703应该分配给上级抗原；

纳米流式推荐使用强的单体荧光素，例如BV421、PE、APC等；

Q8:以下关于样本染色的描述，正确的有：

死活染料在组织、胞内染色Panel中尤其重要；

小鼠的样本的封闭剂的克隆号是2.3G4；

预混抗体时需要多配置2-3管的抗体量，分装时可能体积不够；

染色完后游离抗体清洗与否都可以直接上机，游离抗体对结果影响不大，只是容易残留于流式仪上样管路，只要关机前清洗时间足够长，不洗掉游离抗体也可以；

Q9:关于样本表面染色的描述，正确的有：

抗体滴定的最适抗体量判断标准只有SI值，选择分群更开的最小抗体量；

单染能明显分群，但是混合染色后不分群，说明可能有空间位阻或竞争结合等问题，需要先染这个抗体，再染其它抗体；

红细胞裂解的最适条件是37℃，裂解充分并且死细胞少；

染色Buffer中需要加的有NaN3、BSA、Fc阻断剂、单核阻断等，也需包含抗体特殊的Buffer，例如BV buffer等；

Q10:固定破膜后需要注意的问题有：

固定破膜后细胞大小变小，离心力需增加，FSC的增益值需比表面染色样本更大；

破膜前后表面指标的阳性分群基本不会变化；

样本有基因编辑过的GFP等荧光蛋白时，破膜前需要预固定，防止荧光蛋白流出；

光谱流式检测胞内指标时，空白管不做任何处理，不需要加任何抗体或试剂；

Q11:关于对照管的描述，正确的有：

传统流式实验单染对照可以使用同荧光素的其他抗体染色替代，也可用补偿微球染色替代；

光谱40色panel的FMO对照有39管，大部分实验仅做其中重要的FMO对照；

阴性对照和空白对照，在大部分实验中没有区别；

纳米流式的对照较为特殊，需要做传统流式没有的梯度稀释对照、去污剂对照、染料对照管；

Q12:流式上机过程中的注意事项有：

分选流式的圈门，FSC-SSC散点图不圈死细胞；尽量用FSC和SSC去2次粘连；GFP分选时尽量从FITC-PE双参数图圈门，避免斜向45度角的状态不良的细胞；

传统分析仪检测免疫细胞尽量使用实验增益值，而光谱流式检测免疫细胞尽量使用质控增益值；

光谱流式仪宣称免调补偿，在单染质量不好或阳性圈门不合适时，光谱流式仪也能自动检测并优化出合适的解析矩阵，无需手动进行调整；

纳米流式检测样本之后需要做基线监测确定管路和Buffer洁净度；

流式样本制备注意事项

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